Родился и воспитывался в Китае. Во время второй мировой воны он занимался аэрофотосъемкой. Его карьера началась в Японии в Токио, когда он пришел на студию Toho Studios в 1947 году. Он попросил друзей представить его как технического работника Но время требовало новые образы, новые лица, и не 25-летнего Тосиро Мифунэ не обратили внимание. Один из режиссеров сказал тогда: "У вас же настоящее лицо гангстера, вы должны быть очень убедительны в этом качестве". Так он начал сниматься. Очень скоро на него обратил внимание Куросава, и в 1948 году вышел их первый совместный фильм "Пьяный ангел". Затем последовал "Расемон", который вывел японское кино, а также его создателей, в том числе Куросаву и Мифунэ, на новые просторы мировой киноиндустрии. В 1951 этот фильм получил Гран-при на Венецианском кинофестивале.
Тосиро Мифунэ много снимался в иностранных и совместных картинах. За свою долгую творческую карьеру он был удостоен 60 различных призов как лучший актер, не говоря уж о том, чот из 134 кинокартин, в которых он снимался, 70 получили японские имеждународные премии. Среди них были фильмы Куросавы "Телохранитель" (Yojimbo, 1961) и "Красная борода" (Red Beard, 1964), за роли в которых Мифунэ получил актерские призы в Венеции, в результате чего он стал единственным актером, получившим эти престижные награды дважды.